· poliakrilamidGel mora skupaj z akrilamidnim monomerom, izhodnim materialom polimerizacijo, katalizatorjem ter desnico soli in puferne mešanice skupaj.
· akrilamidin bis (n, n '- metilen dvojni akrilamid) je monomerna matrika gela.
· Amonijev persulfat Začetek procesa polimerizacije adhezije. Za formulacijo lepila je potrebna 10% raztopina amonijevega persulfata, pripravljena v vodi. Večina informacij je pokazala potrebo po aktivni uporabi. Vendar pa lahko 10 -odstotno rešitev postavite na 4 ℃ nekaj tednov brez pomembne izgube aktivnosti. Naredite do 10 ml in zavrzite, ko se lepilo ne združi.
Nasvet: odstotekakrilamidPri zaporedju lepila in beljakovinskega lepila ni enaka. Če uporabljate premiade akrilamid: BIS rešitev, se prepričajte, da dobite pravo steklenico.
· Temed (n, n, n ', n'- tetrametil etilendiamin) je katalizator v rjavi steklenici, nameščeni v hladilniku. Dodajte tik pred nalivanjem lepila.
· Poliakrilamidna elektroforeza, uporabljena steklo v elektroforezi, je treba oprati pred in po vsakič. Po elektroforezi operemo z mehko krtačo in krpo v vroči milni vodi, sperite z destilirano vodo in se posušite.
· Vlaga in prah lahko povzročijo votli polimer. Pred elektroforezo stekleno ploščo očistite s čistilom za steklo in jo obrišite z mehko krtačo. Z destilirano vodo operemo in temeljito posušite s papirjem. Izpiranje s 70% etanolom pred brisanjem s papirjem pomaga očistiti in pospešiti sušenje. Dodajte vzorce akrilamida zaporedoma: bis, voda, puferska raztopina, amonijev persulfat, temed. Dobro se pretresite in takoj nalijte.
Pred polimerizacijo ni treba razdeliti poliakrilamida. (Akrilamid je bil nameščen v vakuumu za odstranjevanje mehurčkov, ker kisik zavira polimerizacijo.)
Nasveti za vzorčenje horizontalnega lepila.
· Košček črnega papirja vstavite v spodnjo škatlo, črno ozadje, da naredite nekaj vzorčne luknje, da jo boste jasneje videli.
· Napolnjen s rezervoarjem z lepilom, tik nad koloidom.
· Če ima rob luč, vklopite luči, pustite, da svetloba sveti koloid. Vzorec narišite v pipeto.
· Uporaba samodejne naprave za pipet.
· V 10-200 MU 1 tekoči premikajoči se lahko uporabite v večini točk na vzorcu. Za zelo majhne luknje v vzorcih (manj kot 10 μ1) je dolga glava pipete, ki se uporablja za sekvenciranje lepila, bolj priročna.
· Pipetting je pravkar potopljen v vzorec in vdihaval počasi premikajočo se tekočino. Vzorec se lahko zdi lepljiv z glicerinom, hitro črpanje pa lahko potegne zračne mehurčke v glavo pipete.
· Vzorci po vdihavanju glave pipetacije bodo nežno premikali tekočo glavo na robu cevi ali brisanje papirja sesali tekočo glavo zunaj kapljic. Pazite, da vzorca ne sesate.
Vstavite vzorec v luknjo vzorca
· Naprava za pipettiranje, da ohranite malo pritiska, vzorci rahlo premikajo prelivno tekočo glavo.
· Glava pipeta, vstavljena v pufer, nekoliko višja od lukenj, ohranja pozitiven tlak. Konico pipete lahko vstavite v majhno luknjo.
· Vzorci počasi in vztrajno. Konica pipete je nameščena nad luknjo v vzorcu točke, vzorec pa se potopi v luknjo. Pustite, da se vzorec potopi, da napolni luknjo v vzorcu, namesto da bi se potisnili.
· Ko se zadnja kapljica vzorca s tekočo glavo, se bo tekočina premaknila na drugo nogo, počasi dvignila tekočino in se premaknila iz pufra
Kako narediti vzorčenje navpičnega lepila?
· Vertikalne luknje za vzorce lepila, oblikovane med dvema koščkoma stekla. V zelo tankem lepilu glave pipete ni mogoče niti vstaviti med dve stekleni plošči. Pazi na glicerin! Pipeto glavo postavite čez luknjo vzorca in vzorec se potopi v luknjo.
· Točkovni vzorec prej, ne pozabite postaviti navpične točke luknje iz polipropilena acilnega gela, ki je čista. Operite nepolimeriziran akrilamid in vodo, ki se lahko pojavi na dnu luknje v vzorcu. Voda lahko vzorčno luknjo bistveno manjši. Uporabite 25 ml ali 50 ml brizg in 18-metrsko iglo. Vlijemo v pufer za elektroforezo in previdno izperete luknjo za vzorce.
· Težko je videti luknjo v vzorcu, hkrati pa je ostalo enostavno. Če obstajajo odvečne luknje, lahko vzorčni pufer testiramo z bromofenolno modro.
Čas objave: MAR-31-2023